人G1型轮状病毒TaqMan荧光定量检测方法的建立与应用

作     者：彭杰 胡晓星 冯悦 甸子芩 孙鷖 牛华 夏雪山 PENG Jie;HU Xiao-xing;FENG Yue;DIAN Zi-qin;SUN Yi;NIU Hua;XIA Xue-shan

作者机构：昆明理工大学医学院昆明理工大学附属医院昆明650500 昆明理工大学生命科学与技术学院云南省分子医学研究中心昆明650500 

基　　金：国家科技支撑计划项目(No.2014BAI01B01)~~ 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2016年第32卷第6期

页      码：512-517页

摘      要：目的本研究旨在建立一种快速准确定量检测人G1型轮状病毒的TaqMan探针荧光实时PCR检测方法。方法以轮状病毒VP6基因为靶基因,分别设计2对引物及其相应的TaqMan探针,扩增目的片段,将目的片段克隆于PCDNA3.1+载体上,体外转录获得RNA,系列稀释后为标准品,建立TaqMan探针荧光定量实时PCR检测方法并对该方法进行验证。结果设计实验找到最优条件下的引物浓度(250nmol/L)、探针浓度(300nmol/L);通过对引起腹泻的人柯萨奇病毒、呼肠孤病毒等进行检测,结果均为阴性,表明该方法具有很好的特异性。该方法的最低检测量为5copies/μL。对该方法进行重复性实验,发现变异率均小于1%,重复性好。用已建立的方法对4份粪便临床样品进行3次重复试验,病毒RNA的检出率为100%。结论本实验初步建立了人G1型轮状病毒TaqMan探针荧光实时PCR检测方法,为G1型轮状病毒的诊断、检测和分子流行病学研究提供了一种新的方法。

主 题 词：人轮状病毒 VP6基因 TaqMan荧光定量PCR 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-2694.2016.06.002

馆 藏 号：203177125...