容量调控氯通道基因siRNA表达载体的构建及其沉寂效应检测

作     者：张勇 贾林涛 李庆霞 王成济 周士胜 杨安钢 ZHANG Yong;JIA Lin-Tao;Li Qing-xia;WANG Cheng-Ji;ZHOU Shi-sheng;YANG An-Gang

作者机构：第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710033 大连大学医学院医学研究中心辽宁大连116622 

基　　金：国家"973"计划资助(2004CB518805) 国家高科技研究与发展计划"863"资助(2004AA217071) 国家自然科学基金(30270602) 

出 版 物：《第四军医大学学报》 (Journal of the Fourth Military Medical University)

年 卷 期：2005年第26卷第9期

页      码：769-772页

摘      要：目的:构建针对容量调控氯通道基因(CLC3)的小干扰RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对CLC3基因的干扰作用.方法:设计CLC3靶向的发夹状siRNA,据此设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPER载体,转化扩增后进行序列测定.用脂质体转染法转染胃癌细胞SGC7901,通过RT PCR、间接免疫荧光检测CLC3基因表达水平的变化.结果:把针对CLC3基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆到pSUPER载体,经过酶切鉴定与测序,结果正确,稳定转染人胃癌细胞SGC7901后,RT PCR、间接免疫荧光检测表明,CLC3基因的表达水平明显降低.结论:构建了针对CLC3基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制CLC3基因表达.

主 题 词：RNA干扰 容量调控氯通道 胃肿瘤 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071009[071009] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-2790.2005.09.001

馆 藏 号：203177819...