猪2型圆环病毒ORF1与ORF2基因和伪狂犬病毒基因的重组与表达的研究

作     者：琚春梅 陈焕春 樊惠英 刘正飞 曹胜波 JU Chun-Mei;CHEN Huan-Chun;FAN Hui-Ying;LIU Zheng-fei;CAO Sheng-Bo

作者机构：华中农业大学动物医学院病毒室武汉430070 

基　　金：国家高技术研究发展计划基金资助项目 (No .2 0 0 1AA2 13 0 5 1) 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2005年第21卷第3期

页      码：370-374页

摘      要：根据GenBank发布的猪2型圆环病毒(PCV2 )序列(AY0 35 82 0 ) ,设计两对特异性引物,采用PCR方法,分别扩增了猪2型圆环病毒ORF1和ORF2基因。将ORF1和ORF2基因的PCR产物回收并酶切后,依次插入到伪狂犬病毒gE gI双缺失通用转移载体pIECMV中,构建了猪2型圆环病毒_伪狂犬病毒重组中间转移质粒pIEORF1_ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移质粒pIEORF1_ORF2与伪狂犬病毒TK- gE- LacZ+ 基因组共转染IBRS_2细胞,待发生细胞病变后收集病毒液进行空斑纯化,利用检测PCV2ORF1基因和ORF2基因的PCR方法筛选重组病毒TK- gE- gI- ORF1-ORF2 + ,用Southernblotting鉴定重组病毒,并用Westernblotting检测ORF1_ORF2融合蛋白的表达情况,在此基础上也测定了重组病毒在不同细胞上的增殖滴度。结果表明,外源基因ORF1和ORF2已成功插入到TK- gE- LacZ+ 亲本株的基因组中,并获得了表达,表达的蛋白可与PCV2阳性血清发生反应。同时发现ORF1和ORF2基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力与亲本株相当。

主 题 词：猪2型圆环病毒,ORF1基因,ORF2基因,伪狂犬病毒,TK^ /gE^ /gI^ /ORF1 ORF2^+ 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-3061.2005.03.006

馆 藏 号：203177827...