环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测志贺氏菌

作     者：李尚阳 周前进 张严峻 潘军航 陈炯 LI Shang-Yang;ZHOU Qian-Jin;ZHANG Yan-Jun;PAN Jun-Hang;CHEN Jiong

作者机构：宁波大学生物与海洋科学系浙江宁波315211 浙江省疾病预防控制中心浙江杭州310051 

基　　金：国家星火计划(No.2014GA701007) 浙江省重大科技专项重点社会发展项目(No.2013C03045-1) 宁波市科技创新团队项目(No.2015C110018) 宁波市科技富民项目(No.2016C10042) 宁波大学学科项目(No.XKL14D2083) 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2016年第43卷第7期

页      码：1616-1626页

摘      要：【目的】将环介导等温扩增技术（LAMP）与横向流动试纸条（LFD）联合应用,建立一种可应用于志贺氏菌快速检测的LAMP-LFD技术。【方法】以福氏志贺氏菌的侵袭性质粒抗原H（ipa H）基因为检测靶标设计3对特异性引物（其中上游内引物Sfl-ipa H-FIP由生物素标记）,进行LAMP反应;同时设计1条异硫氰酸荧光素（FITC）标记的探针Sfl-ipa H-HP,与获得的LAMP产物进行特异性杂交,杂交产物经LFD完成检测。【结果】优化后的LAMP反应条件为63℃ 40 min,加上LFD结果判读共需50 min。LAMP-LFD方法能够特异性检测出福氏志贺氏菌,而对肠炎沙门氏菌等其它4种导致腹泻的致病菌和创伤弧菌等5种常见食物源性致病菌,以及4株不同大肠杆菌的检测结果呈阴性。该方法针对福氏志贺氏菌的检测灵敏度为1.0×10^2 CFU/m L或4 CFU/反应,针对人工污染鲤鱼肠组织的检测灵敏度是5.0×10^2 CFU/m L,是以LAMP外引物Sfl-ipa H-F3/Sfl-ipa H-B3的常规PCR方法的100倍。【结论】建立的LAMP-LFD技术具有操作简单、检测快速准确、检测成本低等优点,有望在志贺氏菌的常规监测和即时检测中被普及使用。

主 题 词：志贺氏菌 侵袭性质粒抗原H基因 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条 检测 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13344/j.microbiol.china.160027

馆 藏 号：203179109...