CMV启动子调控的VEGF-shRNA表达载体的构建及有效干扰序列的筛选

作     者：刘晓艳 方红 陈鸿超 蒋筱凌 LIU Xiao-yan;FANG Hong;CHEN Hong-chao;JIANG Xiao-ling

作者机构：浙江大学医学院附属第一医院皮肤科浙江杭州310003 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30771944) 浙江省卫生厅课题(2007B72) 

出 版 物：《浙江大学学报（医学版）》 (Journal of Zhejiang University(Medical Sciences))

年 卷 期：2010年第39卷第2期

页      码：181-186页

摘      要：目的:构建针对人VEGF基因的小干扰RNA(siRNA)的表达载体,实现CMV启动子调控,转染肿瘤细胞后观察其对VEGF基因的干扰作用,并筛选出有效的VEGF-shRNA。方法:设计三对VEGF靶向的发夹状shRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入质粒pDC311-SV40-RC中,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人骨肉瘤细胞U-2 OS,分别培养3d和7d后收集细胞培养上清液,ELISA检测上清中VEGF蛋白的表达。结果:将针对VEGF基因的siRNA的双链寡核苷酸片段成功克隆到pDC311-SV40-RC载体,经过阳性菌落PCR鉴定与测序,结果正确;转染U-2 OS细胞后,ELISA方法检测蛋白表达水平证实干扰序列3能有效降低VEGF的表达。结论:成功构建了CMV启动子调控的针对VEGF基因的siRNA载体,转染肿瘤细胞后可抑制VEGF的表达,并筛选出有效的干扰序列。

主 题 词：RNA,小分子干扰 血管内皮生长因子A 转染 启动区(遗传学) 寡核苷酸类 序列分析 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3785/j.issn.1008-9292.2010.02.012

馆 藏 号：203179543...