pEGFP基因启动子区甲基化的梯度降落PCR定量检测法

作     者：江艳 王先良 王春晖 王小利 杨怡姝 段小丽 聂静 王菲菲 张金良 

作者机构：厦门大学海洋与环境学院福建厦门361005 中国环境科学研究院环境污染与健康研究室北京100012 安徽医科大学公共卫生学院安徽合肥230032 北京工业大学生命科学学院北京100022 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(20907047) 中央级公益性科研院所基本科研业务专项(2008KYYW05) 

出 版 物：《环境与健康杂志》 (Journal of Environment and Health)

年 卷 期：2010年第27卷第5期

页      码：396-399页

摘      要：目的改进亚硫酸氢钠测序法,并在CMV基因启动子甲基化检测中进行验证。方法提取pEGFP-C3质粒重组人肝癌细胞株HepG2 DNA,亚硫酸氢钠化学修饰,针对修饰后质粒基因CMV启动子序列设计特异引物并结合梯度降落PCR扩增,T-A载体克隆、测序,目标区域甲基化定量。结果 pEGFP-C3质粒基因约600bp的CMV启动子区甲基化水平可以精确定量,检测结果与标准品一致,重复测量结果稳定。结论改进后亚硫酸氢钠测序法能明显减少非特异性扩增,提高PCR效率,更适于基因甲基化状态的检测。

主 题 词：基因 亚硫酸氢钠测序法 甲基化 梯度降落PCR CMV启动子 pEGFP—C3 

学科分类：07[理学] 0713[0713] 

D　O　I：10.16241/j.cnki.1001-5914.2010.05.033

馆 藏 号：203179629...