针对小胶质细胞上BDNF表达的siRNA筛选及其抑制效应检测

作     者：王丽娜 王秀云 左剑玲 许期年 朱卫东 贾晓明 杨建平 WANG Li-na;WANG Xiu-yun;ZUO Jian-ling;XU Qi-nian;ZHU Wei-dong;JIA Xiao-ming;YANG Jian-ping

作者机构：苏州大学附属第一医院麻醉科江苏苏州215006 苏州大学附属第一医院脑神经研究室江苏苏州215006 苏州大学附属第一医院病理科江苏苏州215006 

基　　金：国家自然科学基金资助课题(No30872442) 江苏省卫生厅基金资助课题(NoH200855 H200917) 

出 版 物：《中国药理学通报》 (Chinese Pharmacological Bulletin)

年 卷 期：2010年第26卷第8期

页      码：1021-1026页

摘      要：目的筛选有效抑制小胶质细胞上脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)序列,并观察其对小胶质细胞活性标记物OX-42表达的调节作用。方法设计并合成针对BDNF的siRNA3对(siRNA1588,siRNA283,siR-NA232)及一条带绿色荧光标记的通用阴性对照FAM-siRNA。在LipofectamineTM 2000介导下转染小胶质细胞。分别采用Real-TimePCR及Western blot方法测定并比较其抑制率;采用磺基罗丹明B法(sulforhodamine B,SRB)分析转染复合物的细胞毒性。同时采用免疫荧光组织化学结合共聚焦显微镜观察BDNF和OX-42的表达情况。结果①与阴性对照组及siRNA283、siRNA232相比,BDNFsiRNA1588(50μmol·L-1,脂质体与siRNA比例1∶3)干扰小胶质细胞后,其mR-NA和蛋白的相对表达量最低(P<0.01)。②Lipofectami-neTM 20008μl复合50μmol·L-1siRNA(脂质体与siRNA比例为1∶3),不仅细胞毒性低而且转染效率高(P<0.01),为最佳转染条件。③BNDF和OX-42存在共表达;且siR-NA1588作用后OX-42的平均光密度值(IOD/area)明显降低(P<0.01)。结论①siRNA1588对小胶质细胞上BDNF表达的抑制效果最大。②BDNF在小胶质细胞的活性调节中具有重要作用。

主 题 词：小胶质细胞 脑源性神经生长因子 小干扰RNA 筛选 磺基罗丹明B法 细胞毒性 大鼠 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 071007[071007] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203179699...