孔石莼(Ulva pertusa)LAMP-LFD快速检测方法的建立

作     者：周前进 陈先锋 蔡怡 段丽君 段维军 苗亮 陈炯 ZHOU Qian-Jin;CHEN Xian-Feng;CAI Yi;DUAN Li-Jun;DUAN Wei-Jun;MIAO Liang;CHEN Jiong

作者机构：宁波大学海洋学院宁波315211 宁波检验检疫科学技术研究院宁波315012 

基　　金：国家星火计划项目 2014GA701007号 浙江省重大科技专项重点社会发展项目 2013C03045-1号 宁波市科技创新团队项 2015C110018号 

出 版 物：《海洋与湖沼》 (Oceanologia Et Limnologia Sinica)

年 卷 期：2016年第47卷第2期

页      码：380-389页

摘      要：采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)进行核酸扩增,凭借横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)完成扩增产物检测,建立了可快速检测孔石莼(Ulva pertusa)的LAMP-LFD方法。该方法首先在孔石莼的内转录间隔区序列(internal transcribed spacer,ITS)的8个种内保守区域设计6条特异性引物(上游内引物由生物素标记),进行由生物素标记的LAMP反应;同时,在两条外引物的有效扩增区段内设计1条异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针,生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针特异性杂交后,在LFD上完成结果显示。优化后LAMP的反应条件为63°C反应50min,加上探针杂交与LFD检测共需60min。结果表明,利用该LAMP-LFD方法可特异性地检出孔石莼,对浒苔(Ulva prolifera)等9种常见藻类的检测均呈阴性。利用该方法最低可检测到3.04×10^(–2) pg/μL的孔石莼基因组DNA,是以LAMP外引物进行的常规PCR方法的1000倍。针对一定数量的实际样本的检测结果表明,LAMP-LFD方法与传统的形态学观察的结果一致。因此,本研究建立的孔石莼LAMP-LFD快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高、操作简便等优点,有望成为我国东部沿海孔石莼快速检测和定期监测的有效技术手段。

主 题 词：孔石莼 内转录间隔区 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条 检测 

学科分类：07[理学] 0713[0713] 

核心收录：

D　O　I：10.11693/hyhz20141200344

馆 藏 号：203179988...