利用CRISPR/Cas9系统构建H22细胞GP73基因敲除稳定株及功能鉴定

作     者：陈健康 魏从文 梁慧 王贝晗 钟辉 杨晓莉 CHEN Jian-kang;WEI Cong-wen;LIANG Hui;WANG Bei-han;ZHONG Hui;YANG Xiao-li

作者机构：安徽医科大学武警总医院临床学院合肥230032 武警总医院北京100039 军事医学科学院生物工程研究所北京100850 

基　　金：武警部队院级二类课题资助项目(WZ 2010016 WZ2011021) 

出 版 物：《军事医学》 (Military Medical Sciences)

年 卷 期：2016年第40卷第7期

页      码：549-553页

摘      要：目的利用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除小鼠源肝癌细胞H22中的GP73基因,构建H22细胞GP73基因敲除的稳定细胞株。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计2条特异性识别GP73基因启动子的上下游sgRNA,利用载体p X459质粒,构建2对重组真核表达质粒。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转染至H22细胞内,使用嘌罗霉素加压筛选稳定敲除GP73的H22细胞株,利用免疫印迹检测重组质粒对内源GP73的敲除效果。MTT实验检测GP73被敲除后对细胞增殖能力的影响,再利用划痕实验检测细胞的迁移能力。结果免疫印迹结果说明敲除GP73基因的小鼠源H22细胞株内无GP73蛋白的表达;并且GP73被敲除后,H22细胞的增殖能力和迁移能力减慢。结论通过CRISPR/Cas9系统获得了靶向GP73基因的重组质粒,并且筛选出了稳定干扰GP73表达的细胞株,从而为探讨GP73在肝癌发生中的作用奠定基础。

主 题 词：CRISPR/Cas9系统 GP73 基因敲除 癌,肝细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.7644/j.issn.1674-9960.2016.07.004

馆 藏 号：203181755...