应用TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪肝中戊型肝炎病毒的研究

作     者：林虹 管大伟 邓小玲 梁辉 李柏生 周少君 钟贤武 柯昌文 

作者机构：中山大学公共卫生学院广东广州510080 广东省疾病预防控制中心广东省应急病原学重点实验室 广东省疾病预防控制中心 国家食品安全风险监测广东中心 

基　　金：广东省病原微生物种资源保藏与利用(No.2012B06040012) 十二五重大科技专项-病原谱研究(No.2012ZX10004213-004) 

出 版 物：《华南预防医学》 (South China Journal of Preventive Medicine)

年 卷 期：2015年第41卷第2期

页      码：171-175页

摘      要：目的建立适用于猪肝样本中戊肝病毒检测的荧光RT-PCR方法。方法采用匀浆处理直接提取法（方法一）与聚乙二醇处理法（方法二）两种处理方法对染毒猪肝样本进行病毒富集,针对4种型别戊肝病毒的基因组而设计的特异性引物和探针,建立一套Taq Man荧光定量RT-PCR方法,并评价该方法的准确性和灵敏性。采用新建荧光定量RT-PCR检测人工染毒的猪肝样本并比较两种方法的处理效率。结果所建立的Taq Man荧光定量RT-PCR标准曲线显示在10^2-10^8copies/μL范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999。批内和批间重复性实验结果表明,不同浓度的质粒标准品检测所获得的Ct值的变异系数分别在0.11%-3.75%、2.47%-6.62%间。2种方法均可以检测出10^2copies/μL的染毒猪肝中戊肝病毒拷贝数。结论所建立的Taq Man荧光定量RT-PCR方法具有灵敏度高、稳定性好、特异性强等特点,适用于HEV的定量检测。匀浆处理直接提取法更加快捷,适用于长期监测。

主 题 词：肝 戊型肝炎病毒属 聚合酶链反应 

学科分类：100208[100208] 1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

D　O　I：10.13217/j.scjpm.2015.0171

馆 藏 号：203181977...