猪轮状病毒(G9型)TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作     者：王宇飞 时洪艳 朱向东 陈建飞 袁婧 张鑫 石达 刘建波 王潇博 高晶 冯力 

作者机构：东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪消化道团队黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 

基　　金：黑龙江省科研机构创新能力提升专项(YC 2015 D011) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2015年第37卷第11期

页      码：846-849页

摘      要：为建立灵敏、特异的G9型猪轮状病毒(Po RV)Taq Man的荧光定量RT-PCR检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的G9型Po RV NMTL株的VP7基因保守区域设计一条特异性引物和探针。以104TCID50的病毒液所提取的总RNA进行10倍系列稀释作为标准品,通过对反应条件进行优化,建立了检测G9型Po RV的Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法的相关系数R2=0.991,对其它常见的Po RV(G5)、猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型等猪病病原检测均为阴性,具有良好的特异性;该方法最低可以检测到的病毒滴度为10-3TCID50,比普通RT-PCR方法灵敏度高约1 000倍;组内和组间变异系数均小于0.87%,稳定性高,重复性好。对疑似感染Po RV的45份临床病料样品进行检测,结果表明,该方法阳性率(64.4%)高于普通RT-PCR(44.4%),两者总符合率为80%。本研究建立的方法为Po RV的流行病学调查和早期诊断奠定基础。

主 题 词：轮状病毒 G9基因型 VP7基因 TaqMan荧光定量RT—PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.2015.11.08

馆 藏 号：203182179...