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应用70mer Oligo基因芯片从限制性cDNA片段中钓取目的基因

应用70mer Oligo基因芯片从限制性cDNA片段中钓取目的基因

作     者:石嵘 马文丽 刘翠华 宋艳斌 吴清华 郭秋野 郑文岭 

作者机构:第一军医大学分子生物学研究所广东广州510515 广州军区广州总医院医学实验科广东广州510010 

基  金:国家自然科学基金(39880032) 广州市重点科技攻关项目(99202201) 

出 版 物:《第一军医大学学报》 (Journal of First Military Medical University)

年 卷 期:2004年第24卷第7期

页      码:738-741页

摘      要:目的 探讨采用单一探针寡核苷酸阵列从经限制性显示方法制备的cDNA片段中钓取目的基因片段的方法。方法酵母经常规培养,抽提mRNA逆转录成cDNA后,经限制性显示技术制备成限制性cDNA片段,根据目的基因SSA1设计70mer特异性oligo片段并打印成为寡核苷酸阵列。采用荧光标记的通用引物对上述经限制性显示技术获得的限制性cDNA片段进行标记,与oligo阵列杂交,洗脱,扫描。然后进行杂交后剥除,收集剥除液,采用限制性通用引物扩增,产物克隆于PUC18T载体中,并转化至JM109大肠杆菌中培养,抽提质粒,进行测序鉴定。结果 测序结果BLAST同源性比较表明,用该方法成功的克隆出了目的基因片段。结论 采用70mer寡核苷酸芯片可以直接从限制性显示方法处理的cDNA片段中钓取目的基因,而无需构建cDNA文库。另外,本方法也可用于oligo芯片的杂交后对有表达差异的基因的获取及研究中。

主 题 词:基因芯片 RD-PCR 荧光标记 芯片剥除 

学科分类:0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

核心收录:

D O I:10.3321/j.issn:1673-4254.2004.07.003

馆 藏 号:203186499...

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