CRISPR/Cas技术可有效介导家鸡基因敲除

作     者：左其生 王颖洁 赵瑞丰 程少泽 汪怡临 靳锴 王飞 纪艳芹 路镇宇 张文慧 张亚妮 李碧春 

作者机构：扬州大学动物科学与技术学院扬州225009 

基　　金：国家自然科学基金(31301959 31272429 31472087) 高等学校博士学科点专项科研基金资助课题(20123250120009) 中国博士后基金(2012M511326 2014T70550) 江苏高校优势学科建设工程资助项目 大学生创新创业训练计划项目(201411117033Z) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2016年第47卷第6期

页      码：1266-1271页

摘      要：本研究旨在家鸡上建立一种高效、稳定的基因组定点编辑技术体系,实现目的基因定点敲除,为后续家鸡基因编辑提供操作依据。基于NCBI数据库提供的CDS序列克隆C2EIP(chr2,Expression In PGC)基因全长,并根据基因序列中APM的位置设计特异性gRNA1、gRNA2和gRNA3,并构建cas9/gRNA载体;将设计好的cas9/gRNA转染状态良好的DF-1,利用Luciferase SSA重组检测法、T7E1酶切法以及TA克隆测序法检测gRNA在DF-1细胞中基因的敲除效率。Luciferase SSA重组检测结果表明,只有cas9/gRNA3载体具有基因敲除活性,荧光活性比对照组高两倍,T7E1酶切结果显示cas9/gRNA3基因的敲除活性为27%,TA克隆测序结果表明,30个测序菌液中有8个菌液出现不同数目的碱基缺失或增加,初步估计基因敲除效率为26%。通过本研究在家鸡中初步建立了cas9介导的基因敲除技术,该技术能够稳定的在鸡的细胞DF-1上介导基因敲除。

主 题 词：CRISPR/Cas 基因敲除 鸡 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 090501[090501] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2016.06.024

馆 藏 号：203186602...