影响内标双重PCR靶模板检测灵敏度的因素分析

作     者：姜文灿 岳素文 江洪 梁爽 苑晓舟 葛素君 王成彬 JIANG Wen-can;YUE Su-wen;JIANG Hong;LIANG Shuang;YUAN Xiao-zhou;GE Su-jun;WANG Cheng-bin

作者机构：温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江温州325000 北京泰格瑞分子检验有限公司北京100085 中国人民解放军总医院临检科北京100853 

基　　金：国家重大科学仪器设备开发专项(2012YQ03026107) 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2016年第34卷第4期

页      码：244-246页

摘      要：目的在内标双重PCR系统中寻找影响靶模板检测灵敏度的主要因素,并比较不同检测体系的灵敏度。方法针对HBV基因设计普通引物对和中部同序引物对,比较引物二聚体（PD）含量;控制内标基因的Ct值约为30,调整内标引物浓度为10、8、5、2、1μmol/L,比较不同体系的检测灵敏度;控制内标引物的用量不变,分别测定内标基因Ct值在15、20、25、30时的靶模板检测灵敏度。结果中部同序引物PD的Ct值在35以上,普通引物对PD的Ct值在30~33之间;10、8、5、2、1μmol/L浓度的内标引物需要内标模板的浓度分别为5×10^4、5×10^4、5×10^4、5×10^5、5×10^7IU/m L;不同内标引物用量检测灵敏度均为5×10^3IU/m L,仅使用中部同序引物的单重PCR检测灵敏度为5×10^2IU/m L;内标Ct值在15、20、25、30时靶模板检测的灵敏度分别为5×10^5、5×10^4、5×10^3、5×10^3IU/m L。结论在双重PCR检测体系中,对靶模板检测灵敏度影响最大的因素为内标的模板量,仅使用中部同序引物对的单重PCR具有最高的灵敏度。

主 题 词：双重PCR 引物二聚体 内标系统 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.13602/j.cnki.jcls.2016.04.02

馆 藏 号：203186605...