秦川牛生长抑制素基因克隆及原核表达研究

作     者：周光现 常馨月 阚靖博 张恩平 ZHOU Guang-xian;CHANG Xin-yue;KAN Jing-bo;ZHANG En-ping

作者机构：西北农林科技大学动物科学学院陕西杨凌712100 

基　　金：陕西省13115创新工程专项(2010ZDGC-01) 校基本科研业务费重大项目(Z109021010) 

出 版 物：《家畜生态学报》 (Journal of Domestic Animal Ecology)

年 卷 期：2012年第33卷第3期

页      码：13-18页

摘      要：试验旨在通过基因工程方法获得重组肌肉生长抑制素蛋白。提取秦川牛的骨骼肌总RNA,根据基因库中海福特牛肌肉生长抑制素基因序列设计合成特异性引物,引物两端分别加上BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点及保护碱基,用RT-PCR方法扩增肌肉生长抑制素全长基因,并将其克隆到pMD18-T载体上,测序后经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,将目的片段插入到PGEX-4T-1中,构建原核表达载体PGEX-4T-1-M,将重组表达质粒转化至Rosetta(DE3)中诱导表达。结果表明,扩增的秦川牛肌肉生长抑制素全长基因1 128bp,克隆载体经过DNA序列测定,所得基因与GenBank上发表的一致;成功构建原核表达载体PGEX-4T-1-M,经IPTG诱导,表达出了GST-M融合蛋白,用GST标签抗体做Western blotting印记证明产物大约69ku,与预期大小相符,并在Rosetta(DE3)菌中成功的进行融合蛋白表达。

主 题 词：秦川牛 肌肉生长抑制素 克隆 原核表达 蛋白印迹 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-1182.2012.03.003

馆 藏 号：203187053...