双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α mRNA表达水平

作     者：姚霜 郑璐 于洋 喻妙梅 潘丽莉 张俊 冯悦华 罗光华 YAO Shuang ZHENG Lu YU Yang YU Miao-mei PAN Li-li ZHANG Jun FENG Yue-hua LUO Guang-hua

作者机构：苏州大学附属第三医院综合实验室江苏常州213003 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81201352 81370372) 江苏省自然科学基金资助项目(BK2012154 BK20130244) 常州市应用基础研究项目(CJ20122013) 

出 版 物：《江苏大学学报（医学版）》 (Journal of Jiangsu University：Medicine Edition)

年 卷 期：2015年第25卷第6期

页      码：524-527页

摘      要：目的:建立单管检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和内参GAPDH mRNA表达水平的双重荧光实时定量PCR方法。方法:脂多糖刺激小鼠巨噬细胞Ana-1后提取细胞RNA,经反转录合成c DNA,应用自行设计的不同荧光标记的TNF-α和GAPDH引物探针,经PCR扩增后,在FAM通道和CY5通道分别读取Ct值,同时应用基因测序技术对结果进行验证,并构建质粒标准品分析该方法的灵敏度和重复性。结果:双重荧光实时定量PCR法检测TNF-α的灵敏度达4×101拷贝/μL,检测线性范围可达6个数量级,批内和批间重复性好。结论:新方法消除了目的基因与内参的加样误差,节约成本,快速准确,适用于TNF-αmRNA的定量检测。

主 题 词：双重荧光定量PCR 肿瘤坏死因子-α GAPDH 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.13312/j.issn.1671-7783.y150190

馆 藏 号：203187268...