猪四种病毒性腹泻病原多重PCR检测方法的建立及应用

作     者：熊年年 陶洁 张清真 张春玲 李本强 常宏赏 刘惠莉 XIONG Nian-nian;TAO Jie;ZHANG Qing-zhen;ZHANG Chun-ling;LI Ben-qiang;CHANG Hong-shang;LIU Hui-li

作者机构：上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 

基　　金：上海市农委重点攻关项目[沪农科攻字(2013)第5-5号 沪农科攻字(2013)第3-6号] 上海市扬帆计划项目(15YF1410300) 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2016年第46卷第8期

页      码：972-978页

摘      要：分别以猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因、猪轮状病毒(Po RV)VP6基因、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因、猪源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Npro基因为靶基因,参照Gen Bank上登录的基因序列,利用DNAStar和Oligo7软件设计了4对引物。采用PCR分别扩增各病毒基因,并克隆至p MD18-T载体,获得4个阳性重组质粒。以重组质粒为模板,进行多重PCR方法的优化。特异性试验检测可分别扩增出相应的病毒基因片段;敏感性试验结果显示,检测PEDV、TGEV、Po RV及BVDV质粒的最低拷贝数分别为730copies/L、547 copies/L、6.47×103copies/L、705 copies/L。应用该方法对猪场44份猪腹泻样品进行检测,结果检出15份PEDV样品,3份TGEV样品,2份BVDV样品,其中PEDV与TGEV混合感染样品2份,TGEV与BVDV混合感染样品1份。随机抽取其中2份PEDV阳性样品进行病毒分离,病毒经细胞传3代以上PCR检测均为阳性,对PCR产物测序证实为PEDV。结果表明,本研究建立的多重PCR方法具有快速、简便、特异性强、敏感度高的特点,能够对PEDV、Po RV、TGEV和BVDV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。

主 题 词：猪病毒性腹泻病原 多重PCR检测技术 PEDV TGEV Po RV BVDV 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16656/j.issn.1673-4696.2016.08.006

馆 藏 号：203187332...