一种新的HBV DNA rtA181T耐药突变检测方法

作     者：陈洪涛 何桂蓉 吴诗品 Chen Hongtao;He Guirong;Wu Shiping

作者机构：暨南大学医学院附属第二临床医学院感染内科广东深圳518020 暨南大学医学院附属第二临床医学院检验科广东深圳518020 

基　　金：广东省药学会肝炎用药研究基金(2012G24) 

出 版 物：《南京医科大学学报（自然科学版）》 (Journal of Nanjing Medical University(Natural Sciences))

年 卷 期：2016年第36卷第7期

页      码：880-885页

摘      要：目的 :通过巢式PCR及特异引物,建立一种新的乙肝病毒(HBV)DNA rtA181T耐药突变的PCR直接扩增检测方法。方法:巢式PCR方法第1轮扩增HBV DNA逆转录酶rt活性域片段,第2轮PCR上游引物3′末端碱基设计为与HBV DNA rtA181T突变碱基相同的碱基,扩增出的目的基因片段,即为突变片段。利用该方法 ,本文检测了43例HBV DNA rtA181T变异标本,分析该方法检测的灵敏性;并比较分析低拷贝HBV DNA水平与高拷贝HBV DNA水平下,该方法与PCR-Sanger测序法检测HBV DNA rtA181T突变的一致性。结果:产物经测序证实,突变检测引物巢式PCR法能扩增出HBV DNA rtA181T耐药突变。在HBV DNA水平为24 U/μL、rtA181T突变株含量低至10%时,该方法仍能较好检测出rtA181T变异片段。对43例不同拷贝水平的HBV DNA rtA181T耐药变异临床标本检测显示,该方法检测灵敏性达100%,常规PCR-Sanger测序灵敏性为74%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 :基于巢式PCR及突变引物为基础的HBV DNA rtA181T耐药突变PCR直接检测法能较好地检测HBV DNA rtA181T耐药变异发生;对HBV DNA低拷贝水平下的rtA181T耐药变异检测,该方法灵敏性优于Sanger测序法,且有较好的特异性。这对早期发现HBV DNA耐药突变、及时更改抗HBV治疗策略具有重要临床指导意义。

主 题 词：乙型肝炎病毒 耐药性 突变 基因测定 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

D　O　I：10.7655/NYDXBNS20160724

馆 藏 号：203187369...