鲑鱼甲病毒阳性核酸物质制备及RT-PCR检测方法的建立

作     者：刘敏 杜航 宋傲臣 高帅 唐丽杰 蒋烨 李一经 LIU Min;DU Hang;SONG Aochen;GAO Shuai;TANG Lijie;JIANG Ye;LI Yijing

作者机构：东北农业大学动物科学与技术学院哈尔滨150030 东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 

基　　金：国家科技支撑计划项目(2013BAD12B02) 

出 版 物：《东北农业大学学报》 (Journal of Northeast Agricultural University)

年 卷 期：2016年第47卷第7期

页      码：56-62页

摘      要：为建立快速检测鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)RT-PCR方法,根据Gen Bank公布的E2基因序列(1 375 bp)设计引物,扩增S AV E2全长基因,利用假病毒制备技术获得包裹E2核酸物质(RNA)的SAV假病毒溶液。以SAV假病毒作为阳性核酸物质质控品,以E2F:5 CCG-TTG-CGG-CCA-CAC-TGG-ATG 3 ,E2R:5 CCT-CAT-AGG-TGA-TCG-ACG-GCA-G 3 为引物,优化反应条件,建立SAV的RT-PCR检测方法。结果表明,该方法可扩增SAV E2特异性516 bp的DNA片段,引物最适反应浓度为1.0μmol·L-1,最佳退火温度为57.5℃,对SAV的三种亚型SAV1(V4640)、SAV2(V4619)、SAV5(V4638)检测结果均为阳性,对SVCV、IHNV和IPNV的PCR扩增结果均为阴性;并确定对SAV的核酸最低检出量达1.59 pg;以RT-PCR方法在不同时间对每份样品作3次重复检测,检测结果一致。表明此方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性较好,可用于SAV临床诊断和检测。

主 题 词：鲑鱼甲病毒 SAV E2 核酸物质 RT-PCR 检测方法 

学科分类：0906[农学-水产类] 09[农学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-9369.2016.07.008

馆 藏 号：203187601...