籽用西瓜SCoT-PCR反应体系优化及引物筛选

作     者：杨静 王萍 石磊 YANG Jing;WANG Ping;SHI Lei

作者机构：内蒙古农业大学农学院内蒙古野生蔬菜种质资源与创新重点实验室呼和浩特010019 

基　　金：内蒙古自然科学基金(2016MS0356) 内蒙古科技计划项目(20090707,2010704,20110711,20120212) 内蒙古高寒地区高产安全蔬菜生产的研究与创新项目(NDPYTD2013-3) 

出 版 物：《西北农业学报》 (Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica)

年 卷 期：2016年第25卷第6期

页      码：889-896页

摘      要：采用L_(25)(5~6)正交试验设计,对影响目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)的5个因素(Taq酶用量、Mg^(2+)浓度、模板DNA用量、dNTPs浓度和引物浓度)进行优化试验,建立了籽用西瓜SCoT-PCR反应体系:Mg^(2+)2.5mmol·L^(-1)、dNTPs 0.15mmol·L^(-1)、Taq酶1.5U、引物0.5μmol·L^(-1)、模板DNA 20ng,总体积20μL。比较各因素对扩增反应的结果,其中以Mg^(2+)浓度的影响最大,Taq酶用量的影响最小。应用22个籽用西瓜品种验证该体系稳定可靠,并从41个SCoT引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的22个引物,并逐一筛选出最适退火温度。该反应体系的建立为今后利用SCoT标记技术对籽用西瓜种质遗传多样性评价、指纹图谱构建、种质鉴定、分子标记辅助选择育种等研究提供了新的技术手段。

主 题 词：籽用西瓜 SCoT-PCR 体系优化 正交设计 

学科分类：09[农学] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090201[090201] 

D　O　I：10.7606/j.issn.1004-1389.2016.06.015

馆 藏 号：203187717...