金黄色葡萄球菌肠毒素B基因在大肠杆菌中的克隆及表达

作     者：李飞 周帅 董慧 黄艳梅 梁秉绍 李娟 龙燕 王洁琳 谢永强 杨镒宇 周珍文 LI Fei;ZHOU Shuai;DONG Hui;HUANG Yanmei;LiANG Bingshao;Li Juan;L0NG Yan;WANG Jielin;XIE Yongqiang;YANG Yiyu;ZH0U Zhenwen

作者机构：广州医科大学广州510120 广州市妇女儿童医疗中心510120 

基　　金：广州市医药科技重点项目(201102A212013) 广东省科技厅项目(2014A020212013) 

出 版 物：《检验医学与临床》 (Laboratory Medicine and Clinic)

年 卷 期：2016年第13卷第18期

页      码：2553-2555页

摘      要：目的扩增金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)基因,构建其原核表达载体,并进行诱导、表达,为其应用研究奠定基础。方法根据GenBank中SEB的基因序列,设计一对分别含BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的特异性引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板进行PCR扩增后,经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切,并与做相应酶切的pET-28α(+)连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及测序,用IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot印迹鉴定表达产物。结果成功扩增出SEB基因,基因大小为801bp,重组PET-28α(+)-SEB双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEB在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99%。经IPTG诱导后,pET-28α(+)-SEB/BL21在相应的相对分子质量(35×103)可见融合蛋白以包涵体形式表达,免疫印迹在相应分子量检测到目的蛋白。结论克隆了SEB基因,并成功在大肠杆菌BL21中以包涵体形式表达,为肠毒素B应用研究奠定了基础。

主 题 词：金黄色葡萄球菌 肠毒素B 克隆 表达 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100403[100403] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-9455.2016.18.001

馆 藏 号：203187902...