骨保护素基因修饰的Cos-7细胞系的培养与鉴定

作     者：梅陵宣 曹寅 吴迪 赵春晖 Mei Lingxuan, Cao Yin, Wu Di, et al. College of Stomatology, Anhui Medical University, Hefei 230032,China

作者机构：安徽医科大学口腔医学院230032 

基　　金：安徽省自然科学基金资助项目. 03043304 

出 版 物：《实用口腔医学杂志》 (Journal of Practical Stomatology)

年 卷 期：2005年第21卷第3期

页      码：322-326页

摘      要：目的:构建pSecTag opg真核分泌表达穿梭载体,培养经opg基因修饰的Cos 7细胞系并检测其表达能力,为基因工程技术治疗牙周病提供物质基础。方法:提取293细胞的总mRNA,设计和合成特异性引物,进行逆转录-聚合酶链反应(RT PCR),扩增出具有抑制破骨细胞功能的opg基因cDNA,并将其重组到载体中测序;用脂质体法将目的基因转染至Cos 7细胞,应用免疫组织化学和Westernblot方法证实转染的细胞表达OPG。结果:重组质粒pSecTag2 /B opg经PCR、HindIII单酶酶切及EcoRI和BamHI双酶酶切,电泳显示均能切下与预期大小相符的片段,经测序证实此基因与GenBank中[gi: 33878056]提供的序列完全一致;经免疫组织化学和Westernblot方法检测,在转染opg基因的Cos 7细胞中有OPG表达。结论:成功构建了pSecTag2 /B opg分泌表达穿梭载体,并培养出高分泌表达OPG的Cos 7细胞系。

主 题 词：骨保护素 基因 克隆 载体 细胞表达 

学科分类：1003[医学-口腔医学类] 100302[100302] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-3733.2005.03.009

馆 藏 号：203188143...