苹果sMdCAX1基因超表达载体的构建及遗传转化

作     者：张璐 刘帅 魏萌涵 蔡斌华 王三红 ZHANG Lu;LIU Shuai;WEI Menghan;CAI Binhua;WANG Sanhong

作者机构：南京农业大学园艺学院/果树生物技术实验室江苏南京210095 

基　　金：国家自然科学基金项目(31171935) 江苏省农业科技自主创新项目[CX(15)1022] 中央高校基本科研业务费专项基金(KYZ201310) 

出 版 物：《核农学报》 (Journal of Nuclear Agricultural Sciences)

年 卷 期：2016年第30卷第8期

页      码：1460-1469页

摘      要：为使sMdCAX1基因能在苹果中高效表达,改善苹果对Ca^(2+)吸收转运的能力,本研究构建了sMdCAX1植物超表达载体并将其通过农杆菌介导法转入长富6号苹果中。根据MdCAX1基因序列设计引物,从长富6号中克隆MdCAX1基因,通过PCR方法截除编码MdCAX1基因的N末端序列,获得sMdCAX1片段。利用重叠PCR方法将sMdCAX1序列中的SacI位点进行定点突变,并在序列两端分别添加BamHI和SacI酶切位点,获得长度为1272bp的突变序列sMd1+2Mu。利用BamHI和SacI双酶切sMd1+2Mu和植物表达载体pYH4215,目的片段经回收、连接、转化和筛选,获得植物双元表达载体pYH4215-sMd1,并将该载体转化农杆菌菌株EHA105。以长富6号无菌试管苗叶片为受体,进行遗传转化获得了转基因植株,经鉴定,有6个株系呈GUS染色阳性,其中2个株系呈PCR阳性。进一步对PCR鉴定阳性的株系进行RT-PCR分析,表明sMdCAX1基因在这2个株系中得到表达。本试验结果为进一步研究苹果MdCAX1基因的功能和通过转基因方法提高苹果果实钙含量奠定了基础。

主 题 词：苹果 sMdCAXl基因 植物超表达载体 遗传转化 

学科分类：09[农学] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090201[090201] 

核心收录：

D　O　I：10.11869/j.issn.100-8551.2016.08.1460

馆 藏 号：203188322...