山羊β雌激素受体多克隆抗体的制备及免疫组化方法的建立

作     者：刘海港 李宏梅 王树迎 成子强 刘法孝 窦文文 井维芳 郭慧君 LIU Hai-gang;LI Hong-mei;WANG Shu-ying;CHENG Zi-qiang;LIU Fa-xiao;DOU Wen-wen;JING Wei-fang;GUO Hui-jun

作者机构：山东农业大学动物科技学院、山东省生物工程与疫病防治重点实验室泰安271018 

基　　金：山东省中青年科学家奖励基金(2008BS07005) 国家自然科学基金项目(30871832) 国家科技部科技成果转化项目(2009GB2C600213) 山东省科技攻关项目(2008GG30008018) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2013年第44卷第2期

页      码：302-308页

摘      要：本研究旨在克隆济宁青山羊雌激素受体β(ERβ)基因,进行原核表达,制备多克隆抗体,建立免疫组化分析方法,检测济宁青山羊卵巢和子宫内ERβ分布。根据GenBank发布的绵羊ERβ基因序列设计一对引物,应用RT-PCR方法从济宁青山羊卵巢组织中扩增ERβ部分基因。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体pET32a(+),构建重组表达载体pET32a(+)-ERβ,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定;经Ni-NTA纯化融合蛋白后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并检测抗体效价及特异性;使用该抗体检测济宁青山羊卵巢和子宫组织细胞中的ERβ分布。结果表明,成功扩增出ERβ部分基因,并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌中表达出相对分子质量约为53ku的融合蛋白;Western blotting证明该融合蛋白能与兔抗人的ERβ多克隆抗体特异性反应。制备的多克隆抗体经ELISA检测效价达到1∶213,以此抗体代替购置的标准兔抗人ERβ抗体,进行Western blotting反应,特异性良好;使用该抗体建立免疫组化方法检测结果表明济宁青山羊卵巢颗粒细胞和子宫内膜上皮细胞、平滑肌细胞存在ERβ的分布。本研究获得特异性兔抗山羊ERβ多克隆抗体,使用该抗体建立免疫组化方法首次报道了济宁青山羊卵巢和子宫ERβ的分布表达,为进一步研究β雌激素受体的生物学功能奠定了方法学和形态学基础。

主 题 词：山羊 雌激素受体β 多克隆抗体 免疫组化 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

馆 藏 号：203188496...