NDM-1阳性细菌实时荧光LAMP方法的建立及应用

作     者：陈斌 杨银梅 钟志敏 雷秀霞 刘大渔 徐邦牢 CHEN Bin;YANG Yinmei;ZHONG Zhimin;LEI Xiuxia;LIU Dayu;XU Banglao

作者机构：广州医科大学附属广州市第一人民医院检验科广东广州510180 

基　　金：国家自然科学基金项目(81201163) 广东省医学科研基金项目(B2014341) 广东省自然科学基金项目(2014A030313677) 

出 版 物：《检验医学》 (Laboratory Medicine)

年 卷 期：2016年第31卷第8期

页      码：688-693页

摘      要：目的建立一种实时荧光环介导等温扩增(LAMP)方法快速检测新德里金属β-内酰胺酶1(NDM-1)阳性细菌。方法根据NDM-1基因序列设计4套引物并进行优化,对LAMP反应中的荧光染料SYTO-9浓度进行优化,同时考察该方法的检出限和特异性。利用本方法检测72例临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌。结果本研究建立的实时荧光LAMP方法,其荧光染料SYTO-9的最佳浓度为4μmol/L;63℃恒温扩增35 min可检出101拷贝/μL的标准阳性模板;特异性较好;对72例临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌检出的阳性率为16.7%(12/72),12株NDM-1阳性细菌经测序验证,准确率为100%。结论本研究建立的检测NDM-1阳性细菌的实时荧光LAMP方法具有快速、操作简便、特异性好、敏感性高、准确、可靠等优点,可以直观、实时地观察反应的进行情况,适合临床NDM-1阳性细菌的快速检测。

主 题 词：实时荧光环介导等温扩增 新德里金属β-内酰胺酶1细菌 快速检测 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-8640.2016.08.013

馆 藏 号：203188637...