羊痘病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：安维雪 庞方圆 王艳杰 李旭东 苏日娜 李浩 张七斤 AN Wei-xue;PANG Fang-yuan;WANG Yan-jie;LI Xu-dong;SU Ri-na;LI Hao;ZHANG Qi-jin

作者机构：内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 兽用疫苗国家工程实验室内蒙古呼和浩特010018 金宇保灵生物药品有限公司内蒙古呼和浩特010010 

基　　金：兽用疫苗国家工程实验室资助项目 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2016年第36卷第4期

页      码：572-578页

摘      要：山羊痘和绵羊痘是由羊痘病毒引起的一种急性、热性、接触性传染病。为了更快、更准确的诊断该病,本研究根据Gen Bank已经发表的GTPV和SPPV参考毒株(登录号分别为AY077836和AY077832)A29L基因序列,设计合成了1对特异性引物和2条Taq Man探针,同时制备重组质粒标准品。经过反应条件的优化,建立了羊痘病毒实时荧光定量PCR检测方法,对所建立的实时荧光定量PCR方法反应体系的特异性、灵敏性和重复性进行了评价,并用此方法对19份临床样品进行了检测。结果显示:该诊断方法与4种非羊痘病毒不发生交叉反应,并且山羊痘病毒和绵羊痘病毒之间也不发生交叉反应。该方法的重复性试验变异系数均低于2%,并且双重实时荧光定量PCR最低浓度检测限分别为470和440 fg。对标准阳性模板进行定量检测,生成的标准曲线相关系数分别为0.995和0.997。在检测的临床样品中,GTPV和SPPV阳性分别有14和4份,混合感染有1份。结果表明所建立的方法具有良好的特异性,灵敏性、稳定性,可以对GTPV和SPPV进行准确的定量检测。

主 题 词：实时荧光定量PCR 山羊痘病毒 绵羊痘病毒 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2016.04.06

馆 藏 号：203188732...