siRNA干扰绵羊胚胎成纤维细胞Lig4基因增加同源重组载体重连修复效率

作     者：王伟 王玉霜 黄兰兰 简子健 王新华 刘守仁 皮文辉 Wei Wang;Yushuang Wang;Lanlan Huang;Zijian Jian;Xinhua Wang;Shouren Liu;Wenhui Pi

作者机构：新疆农垦科学院绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室石河子832000 新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 中国农业大学动物科技学院北京100193 

基　　金：国家自然科学基金项目(编号:31560321 31360276) 兵团国际合作项目(编号:2013BC004)资助 

出 版 物：《遗传》 (Hereditas（Beijing))

年 卷 期：2016年第38卷第9期

页      码：831-839页

摘      要：在动物细胞中，抑制非同源末端连接（Non-homologous end joining, NHEJ）修复途径，可以提高同源重组（Homologous recombination, HR）修复基因组双链断裂（Double-strand brakes, DSBs）的发生概率。为了提高绵羊胚胎成纤维细胞的 HR 效率，针对 NHEJ 修复途径中的关键因子 Lig4（DNA ligase 4）基因，本文设计合成4个具有靶向性的 siRNA（Small interfering RNA）。绵羊胚胎成纤维细胞经电转染导入 siRNA，通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和 Western blotting 检测，筛选出有效抑制 Lig4基因表达的2个 siRNA。应用质粒重连法检测HR 修复效率，将 I-SceⅠ酶线性化的 HR 质粒和 siRNA 共转染绵羊胚胎成纤维细胞，经72 h 培养及流式细胞仪检测，与对照组细胞比较，结果表明 HR 质粒重连效率提高了3~4倍。瞬间干扰 Lig4基因的表达可提高 HR质粒重连效率，为改善绵羊胚胎成纤维细胞基因打靶效率提供理论基础。

主 题 词：siRNA Lig4 基因 同源重组 绵羊胚胎成纤维细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.16288/j.yczz.16-074

馆 藏 号：203189119...