家蝇肽聚糖识别蛋白(PGRP-SA)的克隆表达及细菌结合研究

作     者：罗嫚 王宇 胡亚 修江帆 王涛 彭建 尚小丽 吴建伟 LUO Man WANG Yu HU Ya XIU Jiang-fan WANG Tao PENG Jian SHANG Xiao-li WU Jian-wei

作者机构：贵州医科大学寄生虫学教研室贵阳550004 贵州省疾病预防控制中心贵阳550004 

基　　金：国家自然科学基金项目(81360254) 贵州省农业攻关项目(NY3054) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2016年第32卷第8期

页      码：145-151页

摘      要：对家蝇PGRP-SA基因进行克隆表达以及研究其重组蛋白与细菌结合能力。从构建的家蝇(Musca domestica)幼虫cDNA质粒文库中筛选到PGRP-SA基因,以cDNA质粒为模板设计引物,通过PCR扩增,获得PGRP-SA基因完整编码序列。运用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行预测和分析。构建pET-28a(+)-PGRP-SA重组质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达及蛋白纯化。利用半定量RT-PCR检测PGRP-SA在家蝇3龄幼虫不同组织中的表达量差异。PGRP-SA重组蛋白进行微生物结合实验。结果表明,PGRP-SA基因ORF全长615 bp,编码204个氨基酸,理论分子量22.8 k D,等电点9.11,具有保守的PGRP结构域。成功构建了pET-28a(+)-PGRP-SA重组质粒,蛋白经IPTG诱导后在大肠杆菌中获得表达,经亲和层析柱纯化获得目的蛋白,利用Western blot检测证明纯化蛋白与预期大小相符。PGRP-SA在家蝇3龄幼虫血淋巴、脂肪体、前肠、中肠、气管、马氏管都有表达,血淋巴组织中表达量最高,后肠无表达,由此说明PGRP-SA基因的表达具有一定的组织性。PGRP-SA重组蛋白能与金黄色葡萄球菌和大肠杆菌结合,与白色念珠菌不能结合。成功表达及纯化家蝇PGRP-SA蛋白,证实家蝇PGRP-SA能与金黄色葡萄球菌和大肠杆菌结合。

主 题 词：家蝇 先天免疫 肽聚糖识别蛋白 原核表达 微生物结合实验 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 100102[100102] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.08.022

馆 藏 号：203189146...