西藏嵩草ISSR-PCR反应体系优化研究

作     者：胡延萍 包蕊 王莉 石琳 李毅 HU Yan-Ping;BAO Rui;WANG Li;SHI Lin;LI Yi

作者机构：中国科学院西北高原生物研究所西宁810008 中国科学院大学北京100049 

基　　金：国家自然科学基金(31200245) 国家科技支撑计划项目(2012BAC08B04) 中国科学院青年创新促进会项目(2014386) 青海省国际科技合作项目(2015-HZ-808)~~ 

出 版 物：《广西植物》 (Guihaia)

年 卷 期：2016年第36卷第8期

页      码：915-922页

摘      要：西藏嵩草(Kobresia tibetica)为莎草科嵩草属多年生草本,根状茎短,秆密集丛生。生于海拔2 550~4 950 m的河滩地、湿润草地、高山灌丛草甸,分布于甘肃、青海、四川西部、西藏东部,其根系发达,喜湿,耐寒,生活力强。西藏嵩草繁殖以营养繁殖为主、有性繁殖为辅,其茎叶茂盛,有较高的营养价值,产草量高,是青藏高原夏、秋两季的主要放牧饲草。该研究以青藏高原高寒沼泽化草甸的建群种和优势种——西藏嵩草为材料,对影响其ISSR-PCR反应的因素(Mg^(2+)、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物和模板DNA)进行5因素4水平的正交试验,以确定西藏嵩草ISSR分析的最佳反应体系,并筛选适宜的ISSR引物及各引物的最佳退火温度。结果表明:建立了适宜于西藏嵩草ISSR-PCR反应的最佳体系为20μL反应液中包括10×PCR buffer 2μL、1.5mmol·L^(-1)Mg^(2+)、1.0 U Taq DNA聚合酶、0.100 mmol·L^(-1)dNTP、0.3μmol·L^(-1)引物和30~40 ng DNA模板;同时从100条ISSR引物中筛选出了扩增结果清晰、稳定的12条引物,各引物的最佳退火温度为48.0~53.2℃(引物不同,其最佳退火温度也不同);西藏嵩草ISSR-PCR适宜的扩增程序为首先预变性94℃ 5min,然后变性94℃ 20s、复性48.0~53.2℃ 1min、延伸72℃ 80s、38个循环,最后72℃延伸6min。体系稳定性验证结果表明,该体系在西藏嵩草其他样品中所得条带清晰且多态性丰富,为后续西藏嵩草的遗传多样性分析和优良牧草种质资源筛选研究奠定了基础。该研究结果对以西藏嵩草为优势种的高寒沼泽化草甸研究及湿地生态系统的修复和保护具有重要意义。

主 题 词：西藏嵩草 莎草科 ISSR-PCR 反应体系 正交设计 

学科分类：09[农学] 0903[农学-动物生产类] 

D　O　I：10.11931/guihaia.gxzw201411003

馆 藏 号：203189288...