猪瘟病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用

作     者：刘梅芬 王淑娟 闫若潜 王东方 曹伟伟 赵雪丽 李勤楠 李宁 LIU Mei-fen;WANG Shu-juan;YAN Ruo-qian;WANG Dong-fang;CAO Wei-wei;ZHAO Xue-li;LI Qin-nan;LI Ning

作者机构：河南省动物疫病预防与控制中心郑州450008 河南科技大学动物科技学院洛阳471003 

基　　金：河南省科技攻关项目"病死动物无害化处理技术及管理机制研究"(142102310224) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2016年第43卷第9期

页      码：2285-2290页

摘      要：为建立一种快速、特异、灵敏的检测猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)巢式RT-PCR(nested RTPCR)方法,本研究参照GenBank中公布的CSFVE2基因保守区域序列设计2对特异性引物,以CSFV总RNA为模板,优化反应条件,建立CSFV nested RT-PCR方法,对其进行特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的方法对35份临床疑似CSFV感染样品进行了应用检测,并对阳性PCR产物进行克隆测序鉴定。结果表明,本研究成功建立了CSFV nested RT-PCR检测方法,能够特异性地扩增CSFV,但对ST正常细胞对照和其他8种病原对照未扩增出任何条带;稳定性和重复性好;敏感性高,最低检测病毒含量为1TCID50;自35份疑似CSFV感染样品中检出19份阳性样品,PCR阳性产物克隆测序结果表明均为CSFV E2基因片段。本研究成功建立了CSFV nested RT-PCR检测方法,可用于CSFV的快速检测,为CSF的早期检测诊断提供了特异、灵敏的方法。

主 题 词：猪瘟病毒 巢式RT-PCR 检测 建立 应用 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.09.010

馆 藏 号：203189492...