海洋创伤弧菌LAMP快速诊断方法的建立与评价

作     者：张丽娜 王明义 杨小蕾 曹源 张萍萍 胡成进 ZhangLina;Wang Mingyi;Yang Xiaolei;CaoYuan;Zhang Pingping;HuChengjin

作者机构：辽宁医学院辽宁锦州121001 威海市立医院山东威海264200 济南博科生物科技有限公司山东济南250100 济南军区总医院山东济南250031 

基　　金：全军"十二五"科研重点项目(BWS12J014) 

出 版 物：《国际检验医学杂志》 (International Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2016年第37卷第5期

页      码：577-579,582页

摘      要：目的利用环介导等温扩增(LAMP)技术,建立海洋创伤弧菌快速、简便、特异且敏感的检测方法,并对该方法的特异性和灵敏度进行评价。方法选取海洋创伤弧菌溶细胞素(vvhA)基因作为靶基因,根据GenBank公布的序列设计4条LAMP引物;对47株细菌(包括20株弧菌属细菌)进行LAMP和聚合酶链式反应(PCR)扩增,并做特异性比较;对创伤弧菌M06株增菌液10倍倍比稀释,提取DNA后进行灵敏度的检测,并与常规PCR作比较;构建含vvhA基因片段的重组质粒,作为LAMP反应体系的标准阳性对照。结果常规PCR实验出现假阳性结果,而LAMP实验只有海洋创伤弧菌出现阳性扩增,其他样品均为阴性,无假阳性和假阴性结果,表明引物的特异性较好,加入钙黄绿素和电泳结果相一致;针对vvhA基因建立的LAMP技术其最低检测下限为每个反应4×10CFU,是常规PCR(每个反应4×10~2 CFU)的10倍,呈现较好的灵敏度。重复实验过程两遍,PCR和LAMP技术检测结果稳定。结论建立了一种用于检测海洋创伤弧菌的LAMP检测方法,该方法特异性强,灵敏度高,方便快捷,特别适合用于现场和床旁的快速检测。

主 题 词：海洋 创伤弧菌 环介导等温扩增 快速诊断 聚合酶链式反应 

学科分类：100208[100208] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.001

馆 藏 号：203190206...