Smad3基因siRNA表达载体的构建及在瘢痕疙瘩成纤维细胞的沉默效应

作     者：蔡宏 王毅侠 刘玮 孙平 董宁 CAI Hong;WANG Yi-Xia;LIU Wei;SUN Ping;DONG Ning

作者机构：解放军空军总医院皮肤科北京市100142 解放军总医院第一附属医院烧伤研究所 

基　　金：国家自然科学基金资助(81301386) 

出 版 物：《中国激光医学杂志》 (Chinese Journal of Laser Medicine & Surgery)

年 卷 期：2016年第25卷第3期

页      码：148-152页

摘      要：目的构建针对Smad3基因的短片断干扰RNA(small interfer RNA,siRNA)表达载体,观察RNA干扰对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3基因表达的抑制作用。方法根据siRNA设计原则,设计3条针对Smad3基因的siRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后与载体pRNAT-U6连接,行酶切鉴定和DNA序列测定。用脂质体包裹转染瘢痕疙瘩成纤维细胞,荧光定量PCR和Western-blot方法检测Smad3基因的表达情况。结果经测序鉴定DNA片段确已克隆入载体pLVshRNA-puro,测序结果提示三组碱基序列与靶序列完全相同。经荧光定量PCR和Western-blot方法检测示shRNA-smad3(CA3)沉默效率最高。结论证实实验构建的沉默瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3基因表达的siRNA载体获得成功,为下一步以TGF-β信号转导通路的Smad3因子为靶点的瘢痕疙瘩治疗实验研究奠定了基础。

主 题 词：Smad3 siRNA 载体 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 沉默效应 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100206[100206] 10[医学] 

D　O　I：10.13480/j.issn1003-9430.2016.0148

馆 藏 号：203190292...