发夹结构RNA表达载体特异性抑制结肠癌LoVo细胞绿色荧光蛋白基因表达

作     者：马晋平 汪建平 詹文华 彭俊生 高劲松 朱孝峰 殷勤伟 

作者机构：中山大学附属第一医院普通外科广州510080 中山大学达安基因诊断中心 中山大学肿瘤防治中心 Division of Health Science and TechnologyHarvard-MIT 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30271276 30271469) 广东省自然科学基金资助项目(021891) 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2004年第21卷第7期

页      码：792-794,i001页

摘      要：目的构建针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹结构RNA表达载体(SHipU6GFP),观察SHipU6GFP对结肠癌LoVo细胞的GFP特异性抑制作用。方法设计合成针对绿色荧光蛋白GFP基因的发夹RNA(shRNA)序列,构建SHipU6GFP质粒。采用报告基因质粒pCXGFP(5510bp)和含有鼠U6启动子pU6(3.3kb)质粒,应用LipofectamineTM2000将pCXGFP质粒和SHipU6GFP质粒转染K562细胞和LoVo细胞。荧光显微镜观察转染效果和不同时间的转染效率。结果质粒pU6和SHipU6GFP经EcoRⅤ和XbaⅠ酶切电泳后,前者出现3.3kb和约300bp条带,而后者出现3.3kb和约350bp条带,与实验设计的针对GFP的shRNA长度相符。说明本实验已成功构建了针对绿色荧光蛋白GFP基因的SHipU6GFP质粒。K562细胞和LoVo细胞中分别观察到转染pCXEGFP质粒和SHipU6GFP质粒前后发绿色荧光的细胞数目明显减少。结论结肠癌LoVo细胞存在RNA干扰现象,可以进行相关RNA干扰抑制实验。

主 题 词：RNA干扰 绿色荧光蛋白 结直肠肿瘤 SHi-pU6-GFP质粒 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j.issn:1001-9030.2004.07.008

馆 藏 号：203192921...