Rv1196基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

作     者：李邦印 王臻 李大伟 王仲元 吴雪琼 李洪敏 

作者机构：解放军总医院第二附属医院结核病研究所北京100091 江西农业大学动科院南昌330045 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:30471528) 

出 版 物：《广东医学》 (Guangdong Medical Journal)

年 卷 期：2007年第28卷第8期

页      码：1223-1225页

摘      要：目的用PCR方法从结核菌基因组中扩增Rv1196基因,将之重组到pET24b载体,在大肠杆菌中进行融合表达,重组蛋白纯化后通过免疫印迹反应初步鉴定其抗原性和特异性。方法提取H37Rv标准株的基因组DNA;设计Rv1196基因两端的引物,通过PCR方法从基因组DNA中扩增出Rv1196抗原的基因,直接连接到pGEMT载体上,经过筛选鉴定后,将重组子测序;将测序的质粒用NdeI和XhoI双酶切后连接到pET24b载体上,筛选得到重组载体pET24b-39;转化BL21并优化表达条件,采用金属鏊合层析纯化重组蛋白;选取7例结核病阳性临床血清标本和7例健康人血清标本进行W estern b lot分析。结果获得了氨基酸编码序列正确的基因,与数据库中报道一致;Rv1196基因能够在大肠杆菌中高效表达,其表达量约占细菌总蛋白的30%以上;重组抗原不与健康人血清反应,但与结核标本血清呈强烈反应。结论重组Rv1196抗原具有较好的特异性和抗原性,有较好的血清学分析价值。

主 题 词：Rv1196 大肠杆菌 基因表达 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-9448.2007.08.007

馆 藏 号：203193935...