重组质粒pEGFP-N2-GPC3的构建及GPC3对生长因子FGF2、IGF2促进细胞增殖的影响

作     者：王冰 林山 王烈 WANG Bing;LIN Shan;WANG Lie

作者机构：南京军区福州总医院普通外科研究所福州350025 

基　　金：福建省青年科技人才创新项目(2005J074) 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2008年第25卷第7期

页      码：869-871,F0003页

摘      要：目的构建GPC3基因真核表达重组质粒，观察GPC3对生长因子FGF2、IGF2促进肝癌细胞增殖的影响。方法自行设计引物从GPC3原核扩增重组质粒***3中获得编码GPC3的基因片段。应用基因重组技术，将GPC3基因片段克隆到真核表达载体pEGFP-N2中，然后经脂质体介导转染SK-Hep-1，并通过G418（600mg／L）筛选出抗性克隆，应用荧光显微镜及逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）法对转染细胞内pEGFP-GPC3的表达进行鉴定，采用噻唑蓝（MTT）比色法研究GPC3对生长因子FGF2、IGF2促细胞增殖效应的影响。结果限制性内切酶酶切分析、重组质粒测序鉴定表明为正确重组子，荧光显微镜下可见转染的SK-Hep-1胞膜区发出强绿色荧光，RT-PCR表明GPC3在SK-Hep-1中成功表达，生长因子实验中，GPC3明显抑制FGF2促细胞增殖效应，与空质粒转染组比较差异有统计学意义（P〈0．05），IGF2实验组与空质粒转染组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论测序表明，编码的氨基酸序列与人GPC3完全一致；构建完成真核表达重组质粒pEGFP-N2-GPC3；GPC3基因在SK-Hep-1中成功表达；GPC3在FGF2信号通路中可能发挥负性调控因子的作用。

主 题 词：GPC3基因 真核表达载体 绿色荧光蛋白 生长因子 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1001-9030.2008.07.020

馆 藏 号：203194212...