云生毛茛ISSR-PCR体系优化与引物筛选

作     者：石琳 胡延萍 王建科 王钧 许小宁 李毅 王莉 SHI Lin;HU Yan-ping;WANG Jian-ke;WANG Jun;XU Xiao-ning;LI Yi;WANG Li

作者机构：中国科学院西北高原生物研究所西宁810001 中国科学院大学北京100049 青海省县镇企业技术组厂站西宁810008 

基　　金：国家自然科学基金项目(31300269) 青海(应用)基础研究计划项目(2013-Z-756) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2016年第32卷第9期

页      码：65-71页

摘      要：旨在建立稳定可靠的云生毛茛ISSR-PCR反应体系。采用正交试验设计方法,对影响云生毛茛ISSR-PCR扩增结果的Mg2+、d NTP、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA五个因素进行优化筛选,对反应程序进行优化,建立适用于云生毛茛的最佳反应体系和扩增程序,并对反应体系和扩增程序进行验证;在此基础上筛选多态性好的ISSR引物,采用梯度法筛选各个引物的最适退火温度。结果表明,云生毛茛20μL ISSR-PCR的最佳反应体系为:模板DNA 30 ng,Mg2+1.95 mmol/L,Taq DNA聚合酶0.04U/μL,d NTP 0.150 mmol/L,引物0.5μmol/L;最佳反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性20 s,49.6-60.6℃复性1 min,72℃延伸100 s,38个循环;72℃下延伸6 min。在优化的反应体系和反应程序条件下,从100条ISSR引物中筛选获得16条ISSR扩增引物,并确定了引物各自的最适退火温度。经过不同居群云生毛茛的验证,证明优化后体系扩增条带清晰且重复性好,可用于后续云生毛茛遗传多样性的研究。

主 题 词：云生毛茛 ISSR-PCR 正交实验设计 体系优化 引物筛选 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 

D　O　I：10.13560/j .cnki.biotech.bull.1985.2016.09.010

馆 藏 号：203194294...