ssc-miR-148a启动子克隆及其特征分析

作     者：王萍 郝文艳 曹丽华 沈开元 代小丽 李海艳 梁贤威 石德顺 李湘萍 

作者机构：广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530005 中国农业科学院广西水牛研究所南宁530001 

基　　金：广西壮族自治区研究生教育创新计划项目(YCBZ2014013) 国家自然科学基金(31560632) 广西自然科学基金项目(2014GXNSFAA118084) 广西水牛遗传繁育重点实验室开放课题项目(SNKF-2014-03) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2016年第47卷第10期

页      码：1969-1976页

摘      要：为研究猪miR-148a(ssc-miR-148a)的转录调控机制,对其启动子进行了克隆及分析。本试验首先设计特异性PCR扩增引物,分别得到ssc-miR-148a前体上游3个片段,并将其连接到荧光素酶报告载体pGL3-Basic上。通过生物信息学方法,在线分析ssc-miR-148a启动子大概区域、甲基化部位和转录因子结合部位。将重组报告质粒转染293T细胞,分析启动子活性。采用不同浓度碱性成纤维生长因子(bFGF)处理猪成纤维细胞和转染有重组报告质粒的猪成纤维细胞,检测ssc-miR-148a和DNA甲基化转移酶1(DNMT1)的表达,及其对启动子活性的影响。结果显示,克隆得到的ssc-miR-148a启动子区2 043bp片段具有启动子活性,该序列存在5个CpG岛、Sp1及AP2等转录因子结合位点。0、5和10ng·mL-1浓度bFGF处理猪成纤维细胞和转染重组报告质粒的猪成纤维细胞后,ssc-miR-148a表达均显著下降(P0.05)。结果表明,ssc-miR-148a启动子位于前体上游2 043bp片段内,启动子区域有转录因子SP1结合位点,其表达受bFGF的调控。

主 题 词：ssc-miR-148a 启动子 克隆 bFGF DNMT1 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 0905[农学-林学类] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0836[0836] 090501[090501] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2016.10.004

馆 藏 号：203194327...