猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株E11105 N基因的序列分析与原核表达

作     者：张升波 陈绍品 温贵兰 伍昌华 李天珍 李晨 王开功 文明 龚新勇 ZHANG Sheng-bo;CHEN Shao-pin;WEN Gui-lan;WU Chang-hua;LI Tian-zhen;LI Chen;WANG Kai-gong;WEN Ming;GONG Xin-yong

作者机构：贵州大学动物科学学院预防兽医实验室贵州贵阳550025 

基　　金：国家自然科学基金项目(31460668) 贵州省科学技术基金项目(黔科合J字2046号) 贵州大学大学生"SRT"计划项目(贵大SRT(2014)121号) 贵州大学"本科教学工程"项目(JKSP2013004) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2016年第37卷第10期

页      码：41-47页

摘      要：为研究PRRSV N蛋白的结构、功能以及N蛋白在病毒致病中的作用,以临床分离PRRSV毒株E11105为研究对象,采用Primer Premier 5.0设计一对特异性引物,经RT-PCR扩增出N基因片段,利用相关分子生物学软件对N基因序列进行分析;将N基因克隆连接到pColdⅠ原核表达载体上,经PCR、双酶切鉴定及序列测定后,得到重组质粒pColdⅠ-N,将pColdⅠ-N转入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达后用SDS-PAGE蛋白电泳及Western blot验证分析。结果显示,分离株E11105N基因与北美洲型代表株VR-2332、欧洲型代表株Lelystad virus(LV)、中国2006年暴发的高致病性PRRSV代表株JXA1、中国代表株CH-1a的核苷酸序列同源性分别为93.3%、34.7%、99.2%、95.4%,氨基酸序列同源性分别为94.4%、15.3%、94.4%、99.2%;系统进化树显示,E11105株N基因与美洲型代表株VR-2332、中国高致病性JXA1毒株的亲缘关系较近;分离株E11105N基因所编码蛋白不存在跨膜区;二级结构主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,分别占20.33%和63.41%;预测该蛋白可能存在5个较为明显的B细胞优势抗原表位。SDS-PAGE蛋白电泳结果表明,重组N蛋白主要存在于菌体沉淀中,分子质量约为16.7ku;Western blot结果显示,带His标签的重组表达蛋白能被His单克隆抗体识别,显色后条带约为16.7ku,与SDS-PAGE蛋白电泳的条带大小一致。

主 题 词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 N基因扩增 序列分析 原核表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090601[090601] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.16437/j.cnki.1007-5038.2016.10.009

馆 藏 号：203194383...