TaqMan荧光定量PCR检测新型隐球菌方法的建立

作     者：韩慧 黄福达 张秀明 吴炳义 HAN Hui;HUANG Fuda;ZHANG Xiuming;WU Bingyi

作者机构：中山大学附属中山医院/中山市人民医院检验医学中心广东中山528403 南方医科大学附属南方医院临床医学实验研究中心广州510515 

出 版 物：《国际检验医学杂志》 (International Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2016年第37卷第19期

页      码：2697-2698,2701页

摘      要：目的建立TaqMan荧光定量PCR方法定量检测新型隐球菌基因组DNA,为检测隐球菌性脑膜炎提供重要方法。方法在国家生物技术信息中心(NCBI)查找新型隐球菌各亚型的ITS-rDNA序列,序列比对后设计特异性引物和探针,扩增片段为114bp,构建质粒标准品,调整质粒浓度为1.42×10~8 copy/μL^1.42×10copy/μL共8个浓度梯度,分别取2μL作为模板,优化反应条件,建立标准曲线,进行敏感性、特异性、重复性评价,并检测临床确诊的15例隐球菌脑膜炎感染菌株。结果建立的荧光定量PCR可以检测2.84×10~2拷贝的质粒DNA,对临床分离的各10例其他真菌、细菌、乙型肝炎病毒DNA和人类基因组DNA均无扩增曲线,重复性良好,3个浓度的批间变异系数分别为2.86%、1.48%、1.36%,可准确检测15例新型隐球菌。结论成功建立检测新型隐球菌的荧光定量PCR方法,敏感性和特异性较高,结果稳定可靠,可早期、快速诊断隐球菌性脑膜炎。

主 题 词：荧光定量PCR 新型隐球菌 基因组DNA 

学科分类：100208[100208] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 1002[医学-临床医学类] 100401[100401] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.015

馆 藏 号：203194403...