重组结缔组织生长因子shRNA质粒的构建及其对肝星状细胞基因表达的影响

作     者：余琴 王乾华 赵磊 毕昊 YU Qin;WANG Qian-hua;ZHAO Lei;BI Hao

作者机构：武汉血液中心检验科湖北武汉430000 华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科湖北武汉430022 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No:81402640) 湖北省自然科学基金资助项目(No:2014CFB406) 武汉市卫生计生委科研项目(No:WX15B23) 武汉市中青年骨干人才培养工程[武卫生计生(2014)77号] 

出 版 物：《中国中西医结合消化杂志》 (Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine on Digestion)

年 卷 期：2016年第24卷第10期

页      码：733-736,740页

摘      要：[目的]构建同时干扰大鼠结缔组织生长因子(CTGF)2个不同基因位点的shRNA质粒,并将其转染肝星状细胞(HSC),研究其对CTGF基因表达的影响。[方法]针对大鼠CTGF mRNA靶向序列设计并合成2对DNA模版序列,用PCR的方法将2条CTGF靶向特异性的shRNA分别链接到质粒pGenesil1.2载体的U6启动子和H1启动子。将构建的干扰质粒以阳离子脂质体法转染HSC-T6细胞,应用RT-PCR及Western Blot检测CTGF的表达。[结果]成功构建CTGF shRNA重组质粒;通过RT-PCR和Western Blot分析发现干扰质粒组的CTGF mRNA与蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。[结论]重组CTGF shRNA能有效抑制HSC中CTGF的表达。

主 题 词：短发卡状RNA 结缔组织生长因子 质粒 肝纤维化 

学科分类：1008[医学-中药学类] 1006[医学-中西医结合类] 100602[100602] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-038X.2016.10.01

馆 藏 号：203194422...