大分子BAC基因打靶载体转染鸡胚原始生殖细胞

作     者：唐冬生 刘晋荣 蒋泓 曾芳 龚道元 施振旦 张细权 Tang Dong-sheng;Liu Jin-rong;Jiang Hong;Zeng Fang;Gong Dao-yuan;Shi Zhen-dan;Zhang Xi-quan

作者机构：佛山大学医学院医学检验系广东省佛山市528000 华南农业大学动物科学学院动物遗传育种与繁殖系广东省广州市510642 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30671194 30871395)~~ 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2009年第13卷第10期

页      码：1918-1922页

摘      要：背景：利用原始生殖细胞技术可以方便地将各种外源基因转入鸡体内,以较快的速度获得转基因鸡,但到目前为止原始生殖细胞的转染效率仍然很低,且很难进行较大基因片段的转染。目的：拟实现大分子BAC载体对鸡胚原始生殖细胞的转染。设计、时间及地点：基因水平的细胞学体外观察,于2006-08/2008-07在广东省佛山大学完成。材料：种蛋来自华南农业大学鸡场粤黄鸡群,受精蛋在37.5℃、相对湿度为65%的条件下孵化68~72h。BAC-TDN-GID载体由佛山大学分子生物学实验室保存。方法：以rRNA基因及其间隔序列作为同源重组引导序列,构建含GFP基因和hIFN基因的大分子BAC基因打靶载体,将鉴定为阳性的载体进行扩增培养并大量抽提。取课题组孵化至第19期的粤黄鸡胚,挑取其生殖嵴或性腺,胰酶消化法获得原始生殖细胞,并辅以饲养层和生长因子进行培养。采用脂质体介导法在原始生殖细胞内进行基因转移,对存活的细胞进行目的基因DNA水平和RNA水平鉴定。结果：第19期鸡胚性腺原始生殖细胞体外培养48h呈桑椹状或者椭圆状,72h形成细胞集落,过碘酸染色呈紫红色。分子量达30kb的大分子转基因载体BAC-TDN-GID转染鸡胚原始生殖细胞48h可见荧光细胞,表明转染成功。经PCR和RT-PCR鉴定,证实扩增的产物大小与预期结果大致相吻合,目的基因hIFN已经整合进入原始生殖细胞基因组,并已开始表达。结论：实验成功将大分子BAC载体上的外源基因转染入体外分离培养的鸡胚原始生殖细胞。

主 题 词：原始生殖细胞 鸡胚 BAC 大分子 转基因 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 0403[0403] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 1010[医学-医学技术类] 071007[071007] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 

馆 藏 号：203194426...