基于CRISPR/Cas9技术建立敲除OSBPL2基因的HeLa细胞株

作     者：陈庆 鲁雅洁 姚俊 魏钦俊 曹新 Chen Qing;Lu Yajie;Yao Jun;Wei Qinjun;Cao Xin

作者机构：南京医科大学生物技术系江苏南京211166 

基　　金：国家自然科学基金(31171217 31571302) 

出 版 物：《南京医科大学学报（自然科学版）》 (Journal of Nanjing Medical University(Natural Sciences))

年 卷 期：2016年第36卷第9期

页      码：1072-1078页

摘      要：目的 :利用CRISPR/Cas9技术构建OSBPL2基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法 :设计3个单导向RNA(singleguide RNA,sg RNA),分别靶向OSBPL2基因的第2、3和5外显子,以PGK1.1为载体,构建出3个重组真核表达载体。分别转染HeLa细胞后,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,Cruiser TM敲除检测实验和测序共同检验载体靶向效率。选出靶向效率最高的质粒转染HeLa细胞,进行单克隆细胞培养,最后用Western blot鉴定敲除效果。结果:sg RNA正确插入到PGK1.1载体,靶向第2外显子的重组载体转染HeLa细胞并筛选单克隆后,细胞未检测出OSBPL2蛋白的表达。结论:敲除OSBPL2基因的稳定HeLa细胞株构建成功。

主 题 词：CRISPR/Cas9 OSBPL2 HeLa细胞株 单克隆细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

D　O　I：10.7655/NYDXBNS20160910

馆 藏 号：203194489...