猪细小病毒间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

作     者：宋博利 刘保光 平措扎西 拉南次仁 

作者机构：西藏职业技术学院拉萨850030 

基　　金：西藏职业技术学院畜牧兽医专业人才培养模式及课程体系实践研究项目 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 (Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine)

年 卷 期：2016年第9期

页      码：131-134页

摘      要：为建立一种敏感、特异、高通量的猪细小病毒抗体检测方法,参照猪细小病毒(PPV)VP2蛋白的基因序列设计合成1对特异性引物,PCR扩增了VP2蛋白主要抗原区域,将目的片段克隆至p ET30a原核表达载体中,获得了以可溶形式表达的重组VP2蛋白,重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测显示具有良好的抗原性;以纯化蛋白为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测PPV抗体的间接ELISA方法。结果表明:用该方法检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性血清,结果均为阴性;批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%;与血凝抑制试验(HI)方法的符合率为94.49%;应用该方法检测869份疫苗免疫猪血清样品,免疫合格率为87.92%;检测248份未免疫疫苗猪血清样品,阳性感染率为7.25%。

主 题 词：猪细小病毒(PPV) VP2蛋白 间接ELISA 抗体检测 方法建立 临床应用 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2016.1600

馆 藏 号：203194517...