H1和H3亚型猪流感病毒二重TaqMan-MGB探针荧光RT-PCR检测方法的建立

作     者：王建华 陈小金 张俊哲 王玉玲 肖妍 赵丹 谭旭菲 王乃福 陈本龙 董志珍 赵祥平 Wang Jianhua;Chen Xiaojin;Zhang Junzhe;Wang Yuling;Xiao Yan;Zhao Dan;Tan Xufei;Wang Naifu;Chen Benlong;Dong Zhizhen;Zhao Xiaoping

作者机构：天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心天津300456 

基　　金：天津市科技支撑项目(13ZCZDNCO1300) 天津市滨海新区惠民项目(2013-BK15H013) 

出 版 物：《中国动物检疫》 (China Animal Health Inspection)

年 卷 期：2016年第33卷第10期

页      码：90-94页

摘      要：根据H1和H3亚型猪流感病毒（SIV）血凝素（HA）编码基因的保守序列,分别设计合成特异性引物和Taq Man-MGB探针,建立了一种检测H1和H3亚型SIV的二重荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法仅对H1和H3亚型SIV呈特异性扩增,对H9亚型SIV、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（SFV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）和猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）无交叉扩增反应;用该方法检测H1和H3亚型SIV的HA基因的RNA标准对照（SIV-H1-RNA,SIV-H3-RNA）,最适线性检测范围分别为3.7×10~1~3.7×10~8拷贝数/反应和3.4×10~0~3.4×10~8拷贝数/反应,最低检出限分别为38和34个拷贝数;该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于2.0%,显示其具有良好的可重复性。用该方法对520份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪鼻拭子样本进行SIV检测发现,进口猪鼻拭子样本的SIV检测结果均为阴性,12份国内猪鼻拭子样本的H1亚型SIV检测结果为阳性,5份国内猪鼻拭子样本的H3亚型SIV检测结果为阳性。本方法的建立为H1和H3亚型SIV检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。

主 题 词：猪流感病毒 H1亚型 H3亚型 TaqMan探针 荧光RT-PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-944X.2016.10.023

馆 藏 号：203194614...