p300基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌ZR75-1细胞的影响

作     者：陈志达 丁丽华 张亚楠 刘婕 朱杰 叶棋浓 卫勃 CHEN Zhi-Da;DING Li-Hua;ZHANG Ya-Nan;LIU Jie;ZHU Jie;YE Qi-Nong;WEI Bo

作者机构：解放军总医院普通外科北京100853 军事医学科学院生物工程研究所北京100850 

基　　金：国家自然科学基金(81101883 81272231) 北京市科技新星计划(2009A38 2011112) 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2014年第25卷第5期

页      码：621-624页

摘      要：目的:构建p300基因的小干扰RNA(siRNA)慢病毒表达载体,检测其对p300蛋白表达的干扰,以及对乳腺癌细胞ZR75-1生长的影响。方法:利用RNA干扰(RNAi)技术设计并合成针对p300基因的siRNA,并将其克隆到siRNA表达载体pSIH-H1上,经酶切和测序验证,用293T人胚肾细胞包装p300 siRNA慢病毒,感染乳腺癌细胞ZR75-1,建立敲低p300表达的稳定细胞株,通过实时定量PCR和Western印迹检验RNAi的干扰效果,利用细胞生长实验检测p300 siRNA对ZR75-1细胞生长的影响。结果:酶切和测序证明构建了p300 siRNA真核表达载体;实时定量PCR和Western印迹证明构建的siRNA能有效抑制p300基因的表达,并建立了敲低p300表达的稳定细胞株;细胞生长实验证实p300 siRNA可有效促进ZR75-1细胞的生长。结论:构建了p300基因的siRNA真核表达载体,转染细胞后能有效抑制p300基因的表达,且能促进ZR75-1细胞的生长,表明构建的p300 siRNA具有功能。

主 题 词：p300基因 小干扰RNA 慢病毒载体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2014.05.004

馆 藏 号：203197201...