EvaGreen实时荧光定量PCR检测猪细小病毒方法的建立

作     者：容新宗 杨春 郑朝共 刘波 袁源 苗松 何太平 

作者机构：四川大学公共卫生学院四川成都610041 成都蓉生药业有限责任公司 

出 版 物：《中国输血杂志》 (Chinese Journal of Blood Transfusion)

年 卷 期：2012年第25卷第11期

页      码：1173-1175页

摘      要：目的建立以EvaGreen为染料的实时荧光定量PCR检测猪细小病毒(PPV)的方法,为血液制品中病毒去除效果的工艺验证提供高效准确的技术平台。方法根据PPV的VP2基因保守序列,设计并合成引物。对目的片段进行PCR扩增,将扩增的PPV病毒VP2基因片段克隆入PMD19-T载体,重组质粒PMD19-T-VP2经测序鉴定正确后,作为标准品模板,用于标准曲线的绘制和该实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性和重复性检测的材料。结果应用重组质粒PMD19-T-VP2制作的荧光定量PCR扩增曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系;该方法检测灵敏度的下限能达到102copies/μl;与其他DNA病毒和同种属的细小病毒无明显的交叉反应;连续重复检测高、中、低浓度样品,批内批间变异系数小,重复性好。结论以EvaGreen为染料的实时荧光定量PCR检测PPV的方法提高了检测灵敏度,缩短了工艺验证的时间。

主 题 词：EvaGreen 猪细小病毒 血液制品 病毒 去除 实时荧光定量PCR 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100215[100215] 10[医学] 

D　O　I：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2012.11.027

馆 藏 号：203201559...