人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2基因shRNA载体的鉴定和表达

作     者：卢俊 徐世元 崔睿 张庆国 雷洪伊 LU Jun;XU Shi-yuan;CUI Rui;ZHANG Qing-guo;LEI Hong-yi

作者机构：南方医科大学珠江医院麻醉科广东广州510282 

基　　金：国家自然科学基金(30972843)~~ 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2011年第31卷第1期

页      码：86-89页

摘      要：目的构建针对人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2(AMPKα2)基因的pGPU6/GFP/Neo-shRNA表达载体,转染SH-SY5Y细胞株,观测其对AMPKα2基因的沉默效果。方法利用Ambion在线设计软件设计针对人AMPKα2基因的shRNA干扰序列,克隆到pGPU6/GFP/Neo质粒载体上。对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析。用质脂体将重组质粒转导SH-SY5Y细胞株,经G418筛选阳性克隆后用RT-PCR和Western blot法检测AMPKα2的mRNA和蛋白表达水平。结果经DNA测序和酶切鉴定表明,4个shRNA表达载体构建成功。4个重组质粒之一的pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,抑制率为63%。结论成功构建了针对人AMPKα2基因的shRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2。pGPU6/GFP/Neo-shRNAAMPKα2(3)能有效抑制AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞株中的表达,为将来应用其研究AMPK在细胞损伤中的作用奠定了基础。

主 题 词：局麻药 RNAi干扰 单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.12122/j.issn.1673-4254.2011.01.019

馆 藏 号：203201827...