H5和H9亚型禽流感病毒反向斑点杂交同步检测法的建立

作     者：王伟 薛强 邹明强 柴同杰 田甜 WANG Wei;XUE Qiang;ZOU Ming-qiang;CHAI Tong-jie;TIAN Tian

作者机构：山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 中国检验检疫科学研究院北京100123 

基　　金：国际科技合作项目"便携式微流体PCR分析仪研制及检验检疫应用"(2009DFA32720) 国家质检总局科技计划项目(2007IK184) 

出 版 物：《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 (Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2010年第38卷第4期

页      码：7-13页

摘      要：【目的】建立H5和H9亚型禽流感病毒的反向斑点杂交鉴别诊断方法。【方法】在H5和H9亚型禽流感病毒血凝素基因的保守区段内,选择设计2对引物,RT-PCR扩增后将目的片段克隆到pGEM-T载体中,得到重组质粒pGEM-T-H5与pGEM-T-H9。以重组质粒为模版,选择合成寡核苷酸探针与生物素标记引物。将探针通过紫外交联方法固定在带正电荷的尼龙膜上,用生物素标记引物扩增特异性片段,扩增产物经热变性后与探针进行杂交,杂交后显色,出现明显蓝紫色斑点的判定为阳性,无斑点判定为阴性。【结果】利用建立的反向斑点杂交方法检测,H5、H9亚型禽流感病毒的血凝效价分别可达到2-9.6和2-11.9,杂交特异性好,且2亚型间无交叉反应。【结论】建立了H5和H9亚型禽流感病毒的反向斑点杂交检测方法,该方法灵敏度高、特异性好,可以实现H5与H9亚型禽流感病毒的鉴别诊断。

主 题 词：反向斑点杂交 H5 H9亚型禽流感病毒 血凝素 灵敏性 稳定性 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.13207/j.cnki.jnwafu.2010.04.028

馆 藏 号：203203682...