慢病毒载体构建小鼠CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞系

作     者：熊玮 董少红 张键 李江华 吴美善 廖碧红 庞新利 罗林杰 

作者机构：暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院心内科广东省深圳市518020 中国科学院深圳先进技术研究院广东省深圳市518055 

基　　金：深圳市科技创新重点资助课题(201201022)~~ 

出 版 物：《中国组织工程研究》 (Chinese Journal of Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2015年第19卷第20期

页      码：3195-3199页

摘      要：背景:趋化素在动脉粥样硬化时的表达水平上调,趋化素及其受体CMKLR1可能参与了动脉粥样硬化的病理过程。目的:建立CMKLR1基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株。方法:以小鼠CMKLR1基因mR NA序列作为干扰靶点,设计3组靶向CMKLR1基因的shR NA序列,构建慢病毒载体,筛选出干扰最佳的shR NA,在293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养小鼠血管平滑肌细胞,转染慢病毒形成CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞株,用real-time PCR检测感染慢病毒后细胞中CMKLR1 mR NA水平。结果与结论:基因测序结果表明慢病毒载体构建成功,慢病毒的滴度约为8.7×106 TU/m L,p LVX-sh RNA3对CMKLR1基因的抑制效果最显著(P<0.001)。将p LVX-shR NA3转染至血管平滑肌细胞中形成基因缺陷细胞株,用real time PCR血管平滑肌细胞中CMKLR1 mR NA水平,该细胞株中CMKLR1 mR NA水平显著下降(P<0.001),表明慢病毒介导的si RNA可有效沉默小鼠血管平滑肌细胞中CMKLR1基因的表达。

主 题 词：组织构建 组织工程 血管平滑肌细胞 趋化素 CMKLR1 RNA干扰 慢病毒 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 0403[0403] 1002[医学-临床医学类] 08[工学] 1010[医学-医学技术类] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 

D　O　I：10.3969/j.issn.2095-4344.2015.20.015

馆 藏 号：203203727...