RNAi抑制PrP表达载体的构建及其在PrP功能研究中的初步应用

作     者：李玉荣 周向梅 尹晓敏 杨建民 乔俊文 赵德明 LI Yu-rong;ZHOU Xiang-mei;YIN Xiao-min;YANG Jian-min;QIAO Jun-wen;ZHAO De-ming

作者机构：中国农业大学动物医学院国家动物传染性海绵状脑病实验室 

基　　金：国家自然基金(30500371) 国家科技支撑计划(2006BAD06A14) 科技部基金(2005KDA21205-7) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2008年第39卷第3期

页      码：337-342页

摘      要：本文旨在构建有效抑制朊蛋白(Prion protein,PrP)表达的重组质粒,并以此为工具控制PrP表达,从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段(shPrP),退火后与表达载体pG-super(Hairpin siRNA expressing vector)定向连接,构建重组质粒pG-super-shPrP。对重组子进行PCR鉴定,测序正确后,脂质体法转染C6细胞,采用实时荧光定量RT-PCR检测PrP mRNA的表达水平,以验证pG-super-shPrP的抑制效率;结果表明:重组质粒pG-super-shPrP构建成功,且显著降低C6细胞PrP mRNA表达(P<0.05),抑制效率为34.2%。利用pG-super、pG-super-shPrP分别转染C6细胞,并检测细胞SOD总活性及SOD表达水平,探讨PrP对细胞SOD活性的影响及其作用机制,结果表明PrP促进细胞SOD的活性(P<0.01),但对细胞SOD的表达量无影响,即PrP对SOD活性的促进作用与SOD1的表达量无关。本研究在成功构建了PrP的RNA干扰表达质粒的基础上,利用此质粒,在细胞水平上揭示了PrP对细胞SOD活性的促进作用。

主 题 词：RNAi C6细胞 朊蛋白 表达 超氧化物歧化酶 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0366-6964.2008.03.015

馆 藏 号：203203828...